禽流感病毒基因分型PCR检测试剂盒

PCR原理和步骤
PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链反应)
是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法
它包括三个基本步骤: 
(1) 变性(Denature):目的双链DNA片段在94℃下解链;
(2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度
(50℃左右)下与模板上的目的序列通过氢键配对;
(3) 延伸(Extension):在Taq DNA聚合酶合成DNA
的最适温度下,以目的DNA为模板进行合成.
由这三个基本步骤组成一轮循环,
理论上每一轮循环将使目的DNA
扩增一倍
（4）这些经合成产生的DNA又可作为下一轮循环的模板.
所以经25-35轮循环就可使DNA扩增达106 倍。
一、PCR反应中的主要成份
1. 引物：PCR反应产物的特由一对上下游引物所决定。
引物的好坏往往是PCR成败的关键。
引物设计和选择目的DNA
序列区域时可遵循下列原则：
(1) 引物长度约为16-30bp，
太短会降低退火温度影响引物与模板配对，
从而使非特。太长则比较浪费,且难以合成。
(2) 引物中G+C含量通常为40%-60%,可按下式粗略估计引物的解链温度
Tm＝4(G+C)+2(A+T).(3) 四种碱基应随机分布，在3'端不存在连续3个
G或C,因这样易导致错误引发。
(4) 引物3'端与目的序列阅读框架中子或第二位核苷酸对应, 
以减少由于子摆动产生的不配对。
(5) 在引物内, 尤其在3'端应不存在二级结构。
(6) 两引物之间尤其在3'端不能互补, 以防出现引物二聚体. 
减少产量。两引物间不存在4个连续碱基的同源性或互补性。
(7) 引物5'端对扩增特影响不大, 可在引物设计时加上限制酶位点、
核糖体结合位点、起始子、缺失或插入突变位点以及标记生物素、
荧光素、等. 通常应在5'端限制酶位点外再加1-2个保护碱基。
(8) 引物不与模板结合位点以外的序列互补。所扩增产物本身无稳定的
二级结构, 以免产生非特扩增,影响产量。
(9) 简并引物应选用简并程度低的子, 例如选用只有一种子的
Met, 3'端应不存在简并性。否则可能由于产量低而看不见扩增产物。