近期实验室的大家都不约而同地拼搏在ELISA最前线,ELISA好做么?ELISA是不是什么蛋白都能检测?那能不能不跑WB了?面对这一番提问，突然觉得是时候整理一下关于ELISA的实验技能，以备大家不时之需!
首先ELISA是什么，相信只要本科医学的小伙伴们，就算不知道ELISA是干嘛的，也能答出来抗原抗体反应，ELISA就是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。
一、那么接着一个重要的问题就是，ELISA和WB如何选择
相信这个问题肯定很多人考虑过，其实我们选择的时候只要明白两个实验的优缺点就行。
首先，ELISA抗原抗体都能检测，而WB主要检测的就是抗原。对于ELISA主要的特点就是，使用的抗原或抗体是与某种酶连接成的酶标抗原或抗体，由于酶的催化效率很高，可以放大反应效果，增大检测的灵敏度，因此ELISA的检测限可以达到ng级，但WB显色敏感度一般在pg级。同时ELISA在保证实验稳定有效的前提下，是一个很好的定量实验。对于我们熟悉的WB实验，也有一个非常鲜明的优点就是，可以将不同大小的蛋白进行分离，根据目的蛋白的分子量大小预测位置进行检测，这样我们不仅能够知道检测的蛋白是否是多聚体、降解产物等，也能够同时检测不止一个目的蛋白。
同时我们也应该从样本和目的蛋白种类进行考虑，如果需要检测的目的蛋白是血浆或血清中的分泌蛋白，那么
二、ELISA实验过程中需要注意什么?
1.操作过程需牢记
首先，实验进行前要先将试剂盒从冰箱中 恢复室温 。加样时尽量将液体加入孔底，不要有气泡， 提供一个小 tip! 因为有气泡会影响吸光度值的测定，检测之前可以使用小枪头很容易戳破气泡。洗板时注意不要间隔太久，尽量 避免干板现象!按照试剂盒批号和保质期使用，不同批次的试剂严禁混合使用，同时试剂盒使用后 剩余的孔板一定要和干燥剂一起保存 ，防止潮湿。目的蛋白含量低的样本可以咨询厂家是否可以适当延长孵育时间，使其充分结合。 (严格按照说明时间进行，防止非特异性结合，因此小伙伴们还是要多! )
三、ELISA数据如何处理
首先我们都知道要做一个标准曲线，那么ELISA的标准曲线是需要我们拟合曲线得到的，有很多软件都是可以直接帮助我们合成曲线并进行样本含量计算的，这里推荐大家几个良心好用的软件，ELISACalc、origin、Curve Exert、ReaderFit等等。
最后，Elisa并不是简单的加样和检测，实验方法的选择也不是图省事，希望小伙伴们都轻松掌握，快乐实验，快乐发paper!
